Matumizi na tahadhari za ultrafiltration centrifuge tube
1) Chagua bomba la ultrafiltration inayofaa.Kumbuka kwamba utando wa UF hutofautiana katika kiwango chao cha uvumilivu kwa kemikali mbalimbali.Kwa kawaida, mirija ya kuchuja na kukatwa kwa uzani wa kDa 10 inaweza kuchaguliwa kwa kukatwa kwa uzito wa Masi ambayo haipaswi kuwa kubwa kuliko 1/3 ya uzito wa molekuli ya protini inayovutia, kama vile 35 kDa.Ikiwa uzito wa molekuli ya protini ya riba ni karibu kd 10, tube ya ultrafiltration iliyokatwa kwa uzito wa molekuli ya KD 3 inaweza kutumika.
(2) Kichujio cha kuchuja kupita kiasi, kilichonunuliwa hivi karibuni, ni kikavu, na maji ya mwisho yanaongezwa kabla ya matumizi na maji kupita kabisa kwenye utando, umwagaji wa barafu au jokofu kabla ya kupozwa kwa dakika chache.Kisha maji hutiwa, yaani, kioevu cha protini, na ni kiasi gani kinaongezwa, chochote kisichozidi mstari mweupe juu ya bomba.Uendeshaji ni mwepesi, na bomba la kuchuja kichujio linahitaji kupozwa mapema kwenye barafu kabla ya kuongeza myeyusho wa protini.
3) Misa na kitovu cha mvuto vilipaswa kufikia usawa.Kumbuka kasi ya mzunguko na kuongeza kasi sio haraka sana, vinginevyo huharibu moja kwa moja utando wa ultrafiltration.Uchujaji wa ultrafiltration wa Centrifugal ulianzishwa (centrifuge kilichopozwa kabla hadi digrii 4).Baada ya RPM ya centrifuges tofauti kubadilishwa kuwa g, ilikuwa tofauti.Kuongeza kasi ya centrifuge ilirekebishwa kwa kiwango cha chini, kupunguza shinikizo kwenye membrane.Kumbuka, hakikisha kuondoka katikati baada ya centrifuge kufikia kasi yake ya mwisho, au ikiwa una tatizo, huwezi kushughulikia kwa mara ya kwanza.Mwelekeo wa utando kwa spindle ulirekebishwa kulingana na maagizo (kesi ya centrifuge ya angular ni membrane kwa mhimili perpendicular).Katika matumizi ya vitendo, kasi ya mzunguko wa jumla ni ya chini kuliko ilivyo katika maagizo, ili maisha ya tube ya centrifuge inaweza kupanuliwa.
3) Misa na kitovu cha mvuto vilipaswa kufikia usawa.Kumbuka kasi ya mzunguko na kuongeza kasi sio haraka sana, vinginevyo huharibu moja kwa moja utando wa ultrafiltration.Uchujaji wa ultrafiltration wa Centrifugal ulianzishwa (centrifuge kilichopozwa kabla hadi digrii 4).Baada ya RPM ya centrifuges tofauti kubadilishwa kuwa g, ilikuwa tofauti.Kuongeza kasi ya centrifuge ilirekebishwa kwa kiwango cha chini, kupunguza shinikizo kwenye membrane.Kumbuka, hakikisha kuondoka katikati baada ya centrifuge kufikia kasi yake ya marudio, au ikiwa una tatizo, huwezi kushughulikia kwa mara ya kwanza.Mwelekeo wa utando kwa spindle ulirekebishwa kulingana na maagizo (kesi ya centrifuge ya angular ni membrane kwa mhimili perpendicular).Katika matumizi ya vitendo, kasi ya mzunguko wa jumla ni ya chini kuliko ilivyo katika maagizo, ili maisha ya tube ya centrifuge inaweza kupanuliwa.
(4) Ikikolezwa kwa 1ml iliyobaki, chukua 50ul ya myeyusho wa bafa, ongeza 10ul za mtiririko na uone kama kuna rangi yoyote ya buluu, kama uamuzi kama mirija ya kuchuja haina protini.Ikiwa bomba limevuja, mimina tena safu ya juu na utiririke ndani ya bomba mpya ili kuanza kuchuja.Ili kubainisha kwa hakika kama mirija ilikosekana, weka katikati kwa dakika 10 na 5mgml ya BSA kabla ya kutiririka, ukitumia gundi ya protini, au uchanganuzi wa ghafi wa Bradford, na endelea kwa kuongeza mmumunyo uliobaki wa protini uliokolea (ambao hufanya kazi kwenye barafu na kuzuia protini kupata joto) hadi makinikia yote yameongezwa.Jihadharini wakati wa uingizaji hewa ikiwa mvua ya protini hutokea, na kusababisha kufungwa kwa tube.Mvua ikinyesha, tambua ikiwa sababu mahususi ya mvua ni mkusanyiko wa protini nyingi au bafa isiyofaa;Ya kwanza inaweza kutatuliwa kwa kuchujwa kwa mirija mingi ya kuchuja kwa wakati mmoja, kupunguza mkusanyiko, na mwisho kwa kubadilishana suluhu tofauti za bafa hadi hakuna mvua ya protini hutokea.
(4) Ikikolezwa kwa 1ml iliyobaki, chukua 50ul ya myeyusho wa bafa, ongeza 10ul za mtiririko na uone kama kuna rangi yoyote ya buluu, kama uamuzi kama mirija ya kuchuja haina protini.Ikiwa bomba limevuja, mimina tena safu ya juu na utiririke ndani ya bomba mpya ili kuanza kuchuja.Ili kubainisha kwa hakika kama mirija ilikosekana, weka katikati kwa dakika 10 na 5mgml ya BSA kabla ya kutiririka, ukitumia gundi ya protini, au uchanganuzi wa ghafi wa Bradford, na endelea kwa kuongeza mmumunyo uliobaki wa protini uliokolea (ambao hufanya kazi kwenye barafu na kuzuia protini kupata joto) hadi makinikia yote yameongezwa.Jihadharini wakati wa uingizaji hewa ikiwa mvua ya protini hutokea, na kusababisha kufungwa kwa tube.Mvua ikinyesha, tambua ikiwa sababu mahususi ya mvua ni mkusanyiko wa protini nyingi au bafa isiyofaa;Ya kwanza inaweza kutatuliwa kwa kuchujwa kwa mirija mingi ya kuchuja kwa wakati mmoja, kupunguza mkusanyiko, na mwisho kwa kubadilishana suluhu tofauti za bafa hadi hakuna mvua ya protini hutokea.
(5) Hatua chache za kwanza hutumika kukazia protini, na ikiwa kihifadhi kitabadilishwa, ongeza kwa upole bafa mpya (uchujaji wa juu kupitia utando wa ultrafiltration wa 0.22um) hadi takriban 1ml ya jumla ya protini, na uzingatie tena hadi takriban 1ml kwa tatu. mara mfululizo, na mwisho kujilimbikizia kiasi cha mwisho kulingana na ukolezi taka protini, kwa ujumla si zaidi ya 500ul, lakini pia ndani ya 200ul.Fikia 1000 × au zaidi mara tatu, kimsingi kama mabadiliko mengi ya bafa, kama inavyohesabiwa kwa angalau 10 × au zaidi uboreshaji wa sauti kila wakati.
(5) Hatua chache za kwanza hutumika kukazia protini, na ikiwa kihifadhi kitabadilishwa, ongeza kwa upole bafa mpya (uchujaji wa juu kupitia utando wa ultrafiltration wa 0.22um) hadi takriban 1ml ya jumla ya protini, na uzingatie tena hadi takriban 1ml kwa tatu. mara mfululizo, na mwisho kujilimbikizia kiasi cha mwisho kulingana na ukolezi taka protini, kwa ujumla si zaidi ya 500ul, lakini pia ndani ya 200ul.Fikia 1000 × au zaidi mara tatu, kimsingi kama mabadiliko mengi ya bafa, kama inavyohesabiwa kwa angalau 10 × au zaidi uboreshaji wa sauti kila wakati.
Muda wa kutuma: Nov-09-2022